Invitrogen试剂盒的使用需要注意的问题有很多?
各组蛋白样品浓度已知后,最好要将各组蛋白样品浓度调到一致;
计算目的蛋白体积时需要注意此时的蛋白浓度是原蛋白样品浓度的0.8倍,因为蛋白样品要与上样缓冲液混合;
吸取上样缓冲液时要注意是否吸取需要的量,因为有些上样缓冲液比较厚重难吸;
实验过程中要注意细致,避免到最后各组蛋白样品的体积和浓度都不统一。
在低温条件或长期保存导致BCA试剂出现沉淀时,可搅拌或温育使溶解,如发现细菌污染则应丢弃。
因为BCA测定时颜色会随着时间的延长不断加深,且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定,每次测定都需重做标准曲线。若需得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
若测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化,原因可能是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性,参见附件BCA蛋白浓度测定兼容性表。
蛋白标准液的加量应当准确,如果加量不准确,会导致制作出来的标准曲线出现偏差,影响待测样品的浓度计算,应使用精确度高的移液器。
实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可能不适合BCA法测定,可改用蛋白浓度测定试剂盒。